1.收集融合率>90%对数期的贴壁细胞或者悬浮细胞于离心管中,并计数。

2.1000 rmp离心5min,去除离心管中的上清液,收集细胞沉淀。
3.根据细胞类型,加入适量4℃存放的CellCyroTM细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为1x106~1×107cells/m-L。枪头轻柔吹打混匀,制成细胞悬液。
【注】冻存过程中的温度对细胞复苏存活率影响很大,此过程务必保证在低温下操作。如果不能及时冻存于-80℃,可在短暂放于4℃,并尽快转移至-80℃冰箱。冻存液切勿温浴或缓至室温。
4.将离心管中的细胞悬液分装与细胞冻存管中,每管0.5 mL或1 mL。

5.将分装好的细胞直接冻存于-80℃冰箱中,可稳定冻存数年。

6.如若长期保存,可在次日转移至液氮中。